SV40T抗原基因永生化新生大鼠前软骨干细胞株的构建

• 作者: 丁然 张树威 胡伟华 郭风劲 陈安民
• 来源期刊: 医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: SV40T 前软骨干细胞 细胞培养 永生化
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 药物研究
• 页码范围: 460-464
• 页数: 5页
• 分类号: R68|R965.2
• 字数: 4012字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1004-0781.2007.05.005

摘要

目的 建立永生化大鼠前软骨干细胞(PSCs)株,为研究前软骨干细胞的分化机制及临床应用奠定基础.方法 用LipofectamineTM2000介导基因转染,将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代PSCs进行稳定表达,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养,观察细胞形态及生长状况,绘制细胞生长曲线,用免疫细胞化学方法 和RT-PCR鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达.结果 分离获得转化细胞阳性克隆,用免疫组化证实FGFR-3表达阳性,提取RNA后用RT-PCR法成功扩增出588 bp的片段.转染细胞经扩大培养,命名为永生化前软骨干细胞.贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为 (22.98±2.77) h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响.结论 在体外培养条件下,可以从新生大鼠干骺端分离、培养出前软骨干细胞,pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈安民	华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科	315	2057	20.0	29.0
2	郭风劲	华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科	215	1233	17.0	23.0
3	胡伟华	华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科	18	59	4.0	6.0
4	张树威	华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科	8	32	4.0	4.0
5	丁然	华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科	7	33	4.0	5.0