改造的sTRAIL基因在重组毕赤氏酵母菌中的表达及活性分析

• 作者: 周鹏 朱明月 沈文涛
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤氏酵母 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 高效表达 活性分析
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 2578字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2007.01.002

摘要

利用甲醇毕赤氏酵母系统对改造的TRAIL基因进行优化表达研究及产物活性分析,确定改造后的基因表达量是否提高.应用电转化技术将4种重组表达载体转化毕赤氏酵母菌GS115,经Zeocin抗生素筛选、PCR检测获得阳性酵母工程菌,采用摇瓶发酵及SDS-PAGE进行高效表达菌株的筛选,经CM-柱层析、Western blot及MTT法对重组蛋白进行初步纯化、抗原活性检测和生物学活性分析,确定了最佳摇瓶发酵条件:培养基最适pH值5.5～6.5,最佳甲醇诱导浓度为1%,最适甲醇诱导周期为96 h.筛选到高效表达菌株pPICZα-A-sTRAIL/GS11 5、pPICZα-A-sTRAILK/GS115、pPICZα-A-sTRAILA/GS11 5、pPICZα-A-sTRAILAK/GS115,其表达量分别达到67,113.4,98,145 mg/L,改造后的TRAIL具有抗原活性和生物学活性.对TRAlL基因的改造可以提高其在甲醇毕赤氏酵母系统中的表达.