T4溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及抑菌活性测定

• 作者: 刘德虎 徐妙云 李刚强 艾铁民 郝雯静 陈海敏 魏昭荣
• 来源期刊: 中国药学（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: T4溶菌酶 毕赤酵母 电击转化 表达 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 33-37
• 页数: 5页
• 分类号: R927.3
• 字数: 819字
• 语种: 英文

摘要

目的 利用毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白并测定其抗菌活性.方法 T4溶菌酶(T4 lysozyme)基因以N端融合的方式被准确插入到质粒pPIC9K的EcoR Ⅰ-Not Ⅰ位点内,得到分泌型重组表达载体pPIC9K-T4L.该载体首先经限制性内切酶Sal Ⅰ酶切,进而采用电击方法将线性化的重组质粒DNA导入到毕赤酵母中.经过梯度筛选得到多个单拷贝和多拷贝转化重组子.随机挑取部分重组子PCR扩增阳性克隆,经菌体培养和甲醇诱导后获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清液中.结果 表达蛋白经琼脂孔扩散抗菌实验显示抑菌圈明显;重组蛋白对金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌均具有显著抑制作用;多拷贝与单拷贝重组表达子没有抗菌活性差异与蛋白表达量的差异;加热煮沸对于T4溶菌酶蛋白的抗菌活性无明显影响.结论 T4溶菌酶在毕赤酵母中得以成功诱导与表达;表达产物不受拷贝数影响并具热稳定性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	艾铁民	北京大学药学院	38	524	13.0	22.0
2	徐妙云	中国农业科学院生物技术研究所	22	135	8.0	11.0
3	李刚强	中国农业科学院生物技术研究所	16	78	6.0	8.0
4	刘德虎	中国农业科学院生物技术研究所	24	218	9.0	14.0
5	郝雯静	北京大学药学院	2	17	2.0	2.0
9	魏昭荣	中国农业科学院生物技术研究所	3	18	2.0	3.0
10	陈海敏	北京大学药学院	2	17	2.0	2.0