人源基因载体pHrn介导P53基因在Bel-7402中的抗癌研究

• 作者: 刘雄昊 夏家辉 夏昆 尹彪 张雅坤 戴和平 李剑 梁德生 潘乾 薛志刚 邬玲仟 龙志高
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 人源基因载体 人端粒酶逆转录酶(hTERT) p53
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 465-470
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 1360字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2007.05.004

摘要

利用人源基因载体结合人巨细胞病毒(CMV)增强子,人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子及肿瘤抑制基因p53构建肿瘤抑制载体,研究它们在肝癌细胞株Bel-7402中的功能.将CMV增强子(CMVe)与肿瘤特异性启动子hTERTp组合,分别结合GFP及精氨酸型和脯氨酸型肿瘤抑制基因p53,构建GFP表达载体pchEGFP以及p53表达载体pchp53Arg和pchp53Pro;脂质体2000转染肝癌细胞株Bel-7402;24 h后利用荧光显微镜以及流式细胞仪检测GFP的表达;RT-PCR、蛋白质印迹检测p53基因的表达;利用Hoechst 33258、Annexin V/PI染色,检测p53促使肿瘤细胞的促凋亡情况.结果表明:GFP荧光表达载体在Bel-7402细胞中能有效表达;RT-PCR及蛋白质印迹检测到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402细胞内表达;Hoechst 33258染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡实验没有得到明显的细胞凋亡结果.结果表明:实验所构建的肿瘤抑制载体在肝癌细胞Bel-7402能有表达,并能形成外源性p53蛋白,但没有检测到明显的p53促使肝癌细胞调亡的结果.这可能与p53对hTERT的负调控作用有关.