靶向survivin的siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定

• 作者: 何军 侯建全 杨慎敏 温端改 王小林
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: survivin基因 小干扰RNA 遗传载体
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 2735字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2007.01.011

摘要

目的 构建靶向survivin的siRNA表达载体.方法 设计合成靶向survivin的siRNA相应DNA模板单链,将其克隆入空质粒pRNAT-U6.1/Neo,模板链两端分别设计两个不同的酶切位点,退火形成siRNA载体插入片段.用限制性酶切将空载体线性化,T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin.脂质体法将pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株,实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况.结果 PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变.重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达,并具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株.结论 成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-survivin,并转染膀胱癌细胞株,为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯建全	苏州大学附属第一医院泌尿外科	267	1120	14.0	18.0
2	温端改	苏州大学附属第一医院泌尿外科	160	687	12.0	15.0
3	何军	苏州大学附属第一医院泌尿外科	83	300	9.0	11.0
4	王小林	苏州大学附属第一医院泌尿外科	6	54	4.0	6.0
5	杨慎敏	苏州大学附属第一医院泌尿外科	6	31	3.0	5.0