携带猪γ干扰素基因逆转录病毒载体的构建及其在猪肾细胞(PK-15)中的表达

• 作者: 刘新文 姚清侠 郭东春 钱平 陈焕春
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪γ干扰素 逆转录病毒 PA317细胞 PK-15细胞 表达 抗病毒活性 水泡性口炎病毒 口蹄疫病毒
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 141-144
• 页数: 4页
• 分类号: Q93
• 字数: 3968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2007.01.029

摘要

将梅山猪γ干扰素基因定向插入逆转录病毒载体pLXSN(neor),构建逆转录病毒重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒转染逆转录病毒包装细胞系PA317,转染细胞经含G418(400μg/mL)培养基筛选一周后获得稳定产毒的PA317细胞系.从细胞培养上清中提取RNA,进行RT-PCR检测,扩增到目的片段;将上清感染猪肾细胞(PK-15),经含G418(400μg/mL、600μg/mL和800μg/mL)的DMEM筛选一周,间接免疫荧光表明表达的猪γ干扰素主要锚定于细胞膜.收取PK-15细胞上清,在牛肾细胞(MDBK)上进行干扰素抗病毒活性检测,结果显示重组病毒表达的猪γ干扰素抗水泡性口炎病毒(VSV)的活性为1200IU/106 cells·48h.以表达的干扰素处理PK-15细胞后,经细胞病变抑制法测定,重组猪γ干扰素可以抵抗口蹄疫病毒(FMDV)感染.试验结果表明猪γ干扰素基因已成功插入逆转录病毒基因组并在PK-15细胞中表达,表达的重组猪γ干扰素具有较强的抗病毒生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室	331	4866	36.0	53.0
2	姚清侠	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室	11	127	7.0	11.0
3	钱平	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室	28	293	10.0	16.0
4	刘新文	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室	4	55	4.0	4.0
5	郭东春	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒室	7	53	4.0	7.0