人乳头状瘤病毒18型阳性肿瘤疫苗的构建及体外活性鉴定

• 作者: 卢运萍 廖书杰 徐茜 王世宣 王丽 王薇 白向阳 程艳香 邓东锐 马丁
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头状瘤病毒18型 昆虫杆状病毒表达系统 肿瘤疫苗
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 220-224
• 页数: 5页
• 分类号: R392.7
• 字数: 4016字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2007.03.004

摘要

目的:制备人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)18型阳性的肿瘤疫苗,并观察其体外活性.方法:利用昆虫杆状病毒(简称Bac to Bac)表达系统,将HPV18L1基因重组入穿梭质粒pFastBac-Htb,构建HPV18 L1-Htb,通过转座反应,将目的基因片段重组人杆状病毒基因组,分离重组的Bacmid DNA,并转染Sf-9昆虫细胞进行表达;透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的形成;用Ni-NTA系统纯化表达蛋白;以小鼠红细胞凝集试验鉴定蛋白生物活性.结果:收集被转染的Sf-9细胞,提取细胞蛋白,SDS-PAGE检测在相对分子质量大约63 000处可出现一新生蛋白条带,Western blotting证实为HPV18L1蛋白;透射电镜观察证实L1蛋白可自我组装成VLP,且主要定位于细胞核;小鼠红细胞凝集试验证实纯化的蛋白在0.5～4 ng/μl范围可介导小鼠红细胞凝集.结论:Bac to Bac表达系统可高效地制备HPV VLP,并具有体外生物学活性;Ni-NTA系统能高效简便地纯化带有6×His短肽的HPV18L1蛋白.