巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建

• 作者: 俞莉敏 党耕町 杨吉成 郑祖根
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨形态发生蛋白 基因克隆 巢式RT-PCR
• 年，卷（期）: 2007,（14）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 2702-2704
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 3666字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.14.037

摘要

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统.方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成.提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1 188 bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以HindⅢ和XbaⅠ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统.结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1 188 bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符.将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统.结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	党耕町	北京大学第三医院骨科	187	3697	31.0	51.0
2	郑祖根	苏州大学附属第二医院骨科	148	1426	21.0	29.0
3	杨吉成	苏州大学基础医学院基因工程教研室	164	943	16.0	20.0
4	俞莉敏	北京大学深圳医院骨科	13	57	3.0	7.0