短发夹RNA对人骨髓间充质干细胞生长增殖的影响

• 作者: 段洪刚 程杰 肖伯奎 陈始明 陶泽璋
• 来源期刊: 实用医学进修杂志
• 关键词: hTERT RNA干扰 骨髓间充质干细胞 基因治疗 安全性
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 学术窗口
• 页码范围: 14-20
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

目的:观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)生长增殖的影响,探讨靶向hTERT的RNA干扰技术临床应用的安全性.方法:根据RNA干扰原理,利用构建的表达shRNA的靶向hTERTmRNA的真核表达质粒(shRNA1),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2),转染试剂(德国metafectene)和正常培养液处理细胞.24 h后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况;24h、48 h、72 h用MTT法检测细胞增殖活性;48 h后进行HE染色、RT-PCR及端粒酶活性检测.结果:①共聚焦显微镜下见shRNA1及shRNA2组有大量的细胞表达荧光.②相应时间点各组细胞生长增殖无明显差异(P＞0.05);HE染色发现,同等培养条件下,各组细胞生长密度及形态无明显变化.③RT-PCR显示各组细胞均无hTERT mRNA的表达;端粒酶活性为阴性.结论:靶向hTERT mRNA的shRNA对正常hMSCs的生长增殖无明显影响,该方法对不表达hTERT的正常体细胞可能是安全的.