重组人Doppel蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究

• 作者: 单冰 周伟 姜慧英 李萍 董小平 雷艳君 韩俊
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: Doppel蛋白 PRND基因 表达 细胞毒作用
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 265-269
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R373.9
• 字数: 4117字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2007.04.004

摘要

Doppel(Dpl)蛋白是新近发现的PrP相关蛋白.根据GenBank公布的人PRND cDNA序列设计合成特异性引物,用PCR方法从人外周血白细胞总DNA中扩增获得531 bp的人PRND完整基因序列,测序正确后克隆至表达载体,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达重组人Doppel(rhDpl)蛋白.目的蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的60%以上.表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化及羟胺化学裂解法去除标签蛋白,SDS-PAGE检测证实,纯化的rhDpl蛋白相对分子量约为15 kD.Trypan Blue及MTT实验显示,在50μg/mL及以上剂量时,rhDpl蛋白具有抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的作用,在100μg/mL及以上剂量时,rhDpl具有杀伤HeLa细胞的活性,呈现明显的剂量和时间依赖性.Hoechst33342荧光染色观察显示经rhDpl作用的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y呈现出细胞凋亡现象.这些结果提示Dpl蛋白具有体外细胞毒作用,并呈现明显的组织类型特异性.以上工作为进一步了解人Dpl蛋白体内外生物学作用奠定了基础.