甜菜SRAP-PCR反应体系的优化

• 作者: 吴则东 王丛玲 王华忠 韩英
• 来源期刊: 中国糖料
• 学科: 农学
• 关键词: 甜菜 SRAP标记 SRAP-PCR反应条件 变性聚丙烯酰胺凝胶
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: S566.301|Q78
• 字数: 3842字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-2624.2007.02.001

摘要

为了建立适宜甜菜的SRAP反应体系,以40个不同类型的甜菜品系为试验材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响.对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立了适合甜菜的SRAP反应体系为:在20μL反应体系中,模板DNA为40ng,Taq DNA聚合酶1.0U,引物60ng,dNTP(2.5 mmol/L)为1.6μL,扩增程序为94℃预变性3 min,反应前5个循环在94℃1min,35℃1min,72℃1min的条件下运行;随后的35个循环复性温度提高到50℃,最后72℃延伸10min.并利用该反应体系对甜菜40个不同品系进行SRAP反应,用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,不同品系间DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于甜菜的分子标记研究.