假单胞菌SP-6胞外弹性蛋白酶基因的克隆与表达

• 作者: 周泽扬 宫春波 李洪军 贺稚非 高兆建
• 来源期刊: 中国食品学报
• 学科: 工学
• 关键词: 胞外弹性蛋白酶 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-20
• 页数: 8页
• 分类号: TS2
• 字数: 3576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-7848.2007.06.003

摘要

以分离筛选、鉴定的假单胞菌为研究材料,提取假单胞菌的基因组为模板基因,设计引物进行PCR扩增.扩增的条件为94℃预变性4min,98℃变性10 s,58℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃复性10min.用试剂盒回收PCR产物,以PGEM-T Easy Vector为载体,产生重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli)JM109细胞中,于LB平板上进行蓝白筛选阳性克隆.提取阳性克隆的质粒,电泳筛选滞后质粒,EcoRⅠ酶切验证后进行测序,检测弹性蛋白酶基因在JM109 E.coli细胞中的表达.结果表明:PCR扩增出1.67 kb的基因片段,并成功克隆在E.coliJM109细胞中;挑取白斑提取的质粒,检测有滞后质粒,EcoR Ⅰ酶切检测到3.0 kb的载体和1.67 kb的基因片段;以滞后质粒为模板再次进行PCR扩增,扩增出1.67 kb基因片段,证明该质粒为重组质粒,经上海博亚生物技术公司测序为1.67 kb的基因片段,并在E.coliJM109细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周泽扬	西南大学蚕桑学重点实验室	59	388	9.0	17.0
2	李洪军	西南大学食品科学学院	275	2422	22.0	32.0
3	贺稚非	西南大学食品科学学院	205	1777	19.0	29.0
4	高兆建	西南大学食品科学学院	1	4	1.0	1.0
5	宫春波	西南大学食品科学学院	1	4	1.0	1.0