Tet抗性铜绿假单胞菌接合转移pHN102方法研究

• 作者: 刘红艳 张伟 张伟尉 李闻 谢波 马静 黄正
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 luxAB 二亲本杂交 发光
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 93-96
• 页数: 4页
• 分类号: Q93
• 字数: 3634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687X.2007.01.021

摘要

二亲本杂交实验通常要求受体菌不能携带有与质粒上相同的抗性.本次实验中受体菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和重组质粒pHN102都带有四环素(Tc)抗性.考虑到质粒pHN102导入受体菌后至少带有两个Tc抗性基因片段,转移接合子的抗性会增强,所以提高四环素浓度至20 μg/mL,并利用pHN102上携带的luxAB发光酶基因标记受体菌筛选转移接合子,并设立对照菌株.通过抽提质粒、琼脂糖凝胶电泳检测,确定pHN102成功转入P.aeruginosa中.转移接合子经4次转接后,质粒仍可以稳定存在且能够稳定表达.P.aeruginosa (pHN102)的发光动力学曲线表明,加入底物20 min后,发光强度趋于稳定.经液体培养稀释后进行发光度和活菌数测定,发现二者呈显著的线性关系(r=0.994).图4 表2 参6