病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片的研制与临床应用性研究

• 作者: 危敏 孙朝晖 李林海 王从容 王蜀燕 石玉玲
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎,病毒性,人 寡核苷酸序列分析 核酸杂交
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 临床检验
• 页码范围: 1179-1183
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5380字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.11.027

摘要

目的 制备病毒性肝炎联合诊断cDNA芯片,并进行系列优化及临床应用性研究.方法 对于基因组较小的HBV、HDV病毒,采用Primer Premier 5.0软件针对其保守区域设计特异引物,普通PCR技术制备探针;利用限制性显示PCR(RD-PCR)技术制备基因组较大且复杂的HCV芯片探针.为了便于摸索实验条件和更好地进行探针优化,先后制备3种芯片,包括HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片及HBV、HDV、HCV联合诊断芯片.结果 杂交结果显示HBV与HDV诊断芯片、HCV诊断芯片的诊断效果较为满意.从以上2种芯片中选取探针制备HBV、HDV、HCV联合诊断芯片,并对该芯片的检测质量进行初步评估:①检测线性:病毒质粒拷贝数在104～1011copies/ml之间时,芯片检测法显示了较好的线性(r分别为0.990 2、0.992 1、0.981 9,P＜0.01);②特异性:检测黄热病病毒(YFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、登革热病毒(DV)等其他病毒样品结果均为阴性,说明该芯片特异性较好;③重复性:检测HBV、HDV、HCV的批内精密度变异系数(Cv)值为7.1%、7.2%、6.6%,批间精密度Cv值为7.9%、8.2%、7.6%;④准确性:将HBV、HDV PCR片段(共14条)、HCV限制性片段(24条)和部分临床阳性血清(PCR产物)全部进行序列测定,在GenBank中进行Blast比较,结果表明克隆基因均属于相应基因,与理论一致.为了适应临床诊断的要求,对实验条件进行优化,包括减少杂交时间、取消预杂交、将杂交温度提高到52℃等措施.在实验室对芯片进行初步评估后,对临床血清标本进行小规模批量检测实验: 用芯片法和实时定量PCR法检测HBV阳性血清(98例)、HCV阳性血清(42例)和阴性血清(130例),对两种方法进行对比,结果显示芯片法检测与实时定量PCR法有良好的相关性(HBV、HCV的r值分别为0.985 4和0.958 2),检测HBV、HCV、HDV的敏感性和特异性分别为85.7%、76.2%、80.0%和96.7%、95.0%、100%.结论 本研究研制的联合诊断芯片敏感性、特异性均较佳,临床应用前景较好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王蜀燕	广州军区广州总医院检验科	25	90	5.0	7.0
2	石玉玲	广州军区广州总医院检验科	134	972	13.0	24.0
3	孙朝晖	广州市华博生物制药研究所博士后科研工作站	3	5	1.0	2.0
4	危敏	南方医科大学基因工程研究所	28	74	5.0	6.0
5	王从容	南方医院检验科	8	14	2.0	3.0
6	李林海	广州军区广州总医院检验科	76	472	11.0	18.0