单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因突变的实验研究

• 作者: 李铮 王利民 郑菊芬 金卫 黄翼然
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: von Hippel-Lindau病 单细胞 实时定量聚合酶链反应 多重置换扩增 植入前遗传学诊断
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 67-71
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 4639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2007.01.016

摘要

目的 建立单细胞水平检测von Hippel-Lindau病基因(VHL)突变的实验方法.方法 单个淋巴细胞基于多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)的全基因组扩增后进行常规PCR后测序和实时荧光定量PCR,结合各荧光的终点变化判断对应的等位基因存在与否.结果 MDA后单细胞扩增效率为90.91%,污染率为0;通过测序,患者VHL等位基因的脱扣率为26.67%,诊断正确率为73.33%;通过结合相应荧光的终点变化判断患者VHL基因的等位基因的脱扣率为16.67%,正确率为83.33%.结论 单细胞MDA后常规PCR后测序及实时荧光定量PCR能够特异、准确地检测单个淋巴细胞的VHL基因型,两者的联合应用有助于提高检测的准确性.