防御素HNP-3成熟肽酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活和毒性检测

• 作者: 冯云 吴琦 张敏 彭媛媛 熊文碧 王伯瑶 罗林 路会侠 邓璐霞 马生秀 黄宁
• 来源期刊: 航天医学与医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: 防御素 HNP-3 成熟肽 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 151-153
• 页数: 3页
• 分类号: R392.32|Q789
• 字数: 2046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-0837.2007.02.015

摘要

目的 用含防御素HNP-3成熟肽cDNA片段构建酵母双杂交诱饵质粒,进行自激活和毒性检测.方法 培养HL-60细胞,提取RNA,RT-PCR扩增含防御素HNP-3成熟肽的cDNA片段,克隆入pBluescript-SK-II质粒,经测序鉴定后,再亚克隆到人酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PCR及测序鉴定.重组诱饵质粒用缺陷培养基筛选方法进行自激活和毒性检测. 结果构建的重组质粒pBluescript-SK-II-HNP-3,经测序鉴定,插入片段为HNP-3成熟肽的cDNA序列.亚克隆构建的重组诱饵质pGBKT7-HNP-3,测序鉴定表明其插入目的 基因序列无误.重组诱饵质粒自激活和毒性检测显示无自激活现象发生,对酵母细胞AH109无毒性作用. 结论成功构建了防御素HNP-3成熟肽的酵母双杂交诱饵载体;为用酵母双杂交技术研究与防御素HNP-3成熟肽相互作用蛋白质打下了基础.