hClock-(35-47)的表达、纯化及其功能的检验

• 作者: 冀治鸿 刘延友 汪宇辉 王正荣 肖静 赵京卉 高梅
• 来源期刊: 航天医学与医学工程
• 学科: 生物学
• 关键词: hClock-(35-47) 纯化 内皮细胞 穿膜功能
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 学术论著
• 页码范围: 250-253
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2379字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-0837.2007.04.004

摘要

目的 构建hClock-(35-47)的表达质粒,进行诱导表达,纯化,在体外初步鉴定其跨膜功能.方法 合成hClock-(35-47)全长DNA序列,重组入pET-32a表达载体中,测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,构建好重组体的表达菌株.IPTG诱导并优化表达后,以NTA-Ni亲合层析进行分离纯化,及SDS-PAGE和Western bloting鉴定.纯化鉴定后的hClock-(35-47)用FITC标记,以一定的浓度孵育体外培养的血管内皮细胞(ECV-304),荧光显微镜下观察其穿膜活性.结果 成功构建了hClock-(35-47)的表达载体,插入片断为51 bp,表达产物相对分子质量约为21 kD,经Western bloting 鉴定,与抗His-Tag抗体有特异性反应, 与培养的ECV-304孵化,显示具有穿膜功能.结论 原核表达的hClock-(35-47)仍然保留其穿膜功能,为进一步研究提供基础.