猪细小病毒PPV-SD1株VP2全基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘吉山 南松剑 庄金秋 沈志强 王金良 管宇 谢金文 郝静
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 VP2基因 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: S858.258.3
• 字数: 3060字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-5130.2007.12.005

摘要

为研究猪细小病毒PPV-SD1分离株的VP2蛋白的结构与功能,自行设计引物,通过PCR扩增的方法,获得VP2全基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序,然后亚克隆到pET30a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,标记为pET30a-VP2.将阳性重组质粒转化进RosettaTM宿主菌中,通过改变IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定最佳诱导条件为:IPTG终浓度1.0 mmol/L、诱导温度37℃、诱导时间为3～4 h.经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白相对分子量约为68 ku,具有良好的免疫学活性.