成骨肉瘤细胞SOSP-9607中miRNA的克隆与验证

• 作者: 杨彤涛 范清宇 裘秀春 韩建伟 马保安 高杰 鱼兵
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肉瘤 SOSP-9607细胞系 microRNA 筛选 克隆 Northern blot
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 快速报道
• 页码范围: 561-565
• 页数: 5页
• 分类号: R730.231
• 字数: 4034字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2007.06.001

摘要

背景与目的:microRNA(miRNA)是一类非编码蛋白,并参与转录后调节的单链小分子RNA(约20～25个碱基),对基因表达具有重要调控作用,与肿瘤的发生存在着密切的关系.本研究拟克隆成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中miRNA,并对部分功能性基因进行验证.方法:以SOSP-9607细胞作为实验对象,分离提取细胞内小片段RNA(≤200 nt),多聚腺苷酸化和5'连接子连接后,通过RT-PCR进行反转录和扩增,克隆到pCR 4-TOPO载体上得到大约109 bp DNA片段,测序后经过生物信息学分析确定miRNA的表达情况.根据当前miRNA的研究现状,在克隆到的miRNA中选取部分功能性miRNA和新发现miRNA,合成相应探针后与从SOSP-9607细胞、HeLa细胞和成骨肉瘤组织中分离出的小片段RNA进行Northern印迹验证.结果:克隆测序后得到182个克隆体,经生物信息学分析发现有47个miRNA(25种),其中含有23种已知的miRNA和2种Nature杂志上预测的miRNA(miR-165和miR-166).选取的三条实体瘤相关的miRNA(miR-21、miR-20a、miR-17-5p)以及两条预测的miRNA进行Northern印迹验证,miR-21、miR-20a、miR-17-5p在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中均表达,预测的miR-165和miR-166在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中亦均表达,但miR-166在HeLa细胞中没有表达.结论:克隆了SOSP-9607细胞中的miRNA,并验证了部分功能性miRNA的表达,提示miRNA与肿瘤发生可能有密切的关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范清宇	第四军医大学唐都医院全军骨科中心	248	1657	18.0	27.0
2	裘秀春	第四军医大学唐都医院全军骨科中心	62	329	9.0	15.0
3	杨彤涛	第四军医大学唐都医院全军骨科中心	65	330	9.0	13.0
4	高杰	第四军医大学唐都医院全军骨科中心	39	166	7.0	11.0
5	韩建伟	第四军医大学唐都医院全军骨科中心	8	85	5.0	8.0
6	鱼兵	第四军医大学唐都医院全军骨科中心	14	104	6.0	9.0