TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用

• 作者: 刘冬妍 刘沛 崔巍 马力
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子-α 紧密连接蛋白claudin-l Caco-2细胞 免疫荧光 免疫印迹 实时定量聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2007,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1788-1793
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 6532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.16.003

摘要

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100 μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位.实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果:免疫荧光染色可见对照组claudin-l沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDaclaudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100 μg/L:0.31±0.02,0.24±0.05 vs 0.43±0.09P＞0.05,P＜0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24 h或100 μg/LTNF-μ作用不同时间(4,8和24 h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论:TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘沛	中国医科大学附属第一医院消化内科	188	1110	17.0	26.0
2	崔巍	中国医科大学附属第一医院消化内科	51	437	12.0	19.0
3	刘冬妍	中国医科大学盛京医院感染科实验室	51	341	9.0	16.0
4	马力	中国医科大学盛京医院感染科实验室	49	473	12.0	20.0