Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

• 作者: 何健 崔中利 李波 李顺鹏 管莉菠 蔡天明
• 来源期刊: 土壤学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多聚磷酸盐激酶 ppk全基因及上下游序列 快速染色体步移方法(SEFA-PCR)
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 页码范围: 727-733
• 页数: 7页
• 分类号: S154.39
• 字数: 4472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0564-3929.2007.04.021

摘要

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putida GM6为研究材料.为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp).随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adaptor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537).构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E. coli BL21(DE3)/ pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物.且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率.这表明ppk基因在E. coli中的过量表达,导致了E. coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐.