猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

• 作者: 何雁南 司有辉 姚清侠 徐卓菲 曹毅 钱平 陈焕春
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪β-干扰素 毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性 口蹄疫病毒
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 506-512
• 页数: 7页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4637字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2007.05.016

摘要

为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因(mPoIFNβ)插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ.将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法(LiCl),与鲑鱼精DNA(ssDNA)共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株.以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明:表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%～30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达.对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应.以细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素抗病毒活性,在MDBK(牛肾细胞系)中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×106 U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	331	4866	36.0	53.0
2	姚清侠	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	11	127	7.0	11.0
3	徐卓菲	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	8	48	4.0	6.0
4	何雁南	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	4	53	4.0	4.0
5	司有辉	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	3	42	3.0	3.0
6	钱平	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	28	293	10.0	16.0
7	曹毅	华中农业大学预防兽医学院动物病毒室	6	67	4.0	6.0