一种新穿膜肽的构建、表达及其活性检测

• 作者: 姜丽娟 李校堃 王怡 蔡绍晖
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 穿膜肽 绿色荧光蛋白 血脑屏障 跨膜效率
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 79-84
• 页数: 6页
• 分类号: Q514+.3
• 字数: 3678字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2007.02.001

摘要

通过对穿膜肽TAT-PTD构效关系的分析和结构改造,构建能有效进入血脑屏障且低毒的新穿膜肽.该研究用分子克隆技术构建出表达型载体pET28a-T1-GFP,重组质粒在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白His-T1-GFP,经组氨酸亲和层析纯化后,用荧光显微镜和免疫组化的方法来检测His-T1-GFP在活体动物小白鼠体内的跨膜递送作用.经测序证实成功构建了表达型载体pET28a-T1-GFP,融合蛋白His-T1-GFP在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达率为20%.经组氨酸亲和纯化,得到纯度达85%的融合蛋白.SDS-PAGE和Western Blotting显示纯化蛋白为His-T1-GFP,动物实验表明融合蛋白His-T1-GFP能够有效跨过血脑屏障,主要分布在大脑皮层和海马回.该研究成功地构建了一种新的穿膜肽-T1,为其携带有生物活性的大分子物质到达脑部进行蛋白治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李校堃	温州医学院药学院	125	899	15.0	21.0
3	王怡	温州医学院药学院	16	44	3.0	6.0
4	蔡绍晖	暨南大学药学院	63	488	11.0	19.0
7	姜丽娟	温州医学院药学院	2	12	1.0	2.0