甲状腺转录因子-1融合表达载体的构建及体外活性鉴定

• 作者: 刘智 宋怀东 施静艺 潘春明 白雪涛 盛燕 程烽 陈漪
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 甲状腺转录因子-1 真核表达 转录翻译 电泳迁移率变动分析
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q782|Q786
• 字数: 4340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.01.001

摘要

目的:构建人甲状腺转录因子-1(TTF1)编码基因的真核表达载体pcDNA3.1/rmyc-His(-)C-TTF1,并观察其蛋白质体外转录翻译情况.方法:据已知的TTF1基因序列,应用巢式PCR技术,从人肺腺癌细胞株SPC-A1中扩增出TTF1基因,通过TA连接将其克隆入pGEM-T-easy载体,经测序鉴定后,双酶切插入真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His(-)C中;重组质粒经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定后,进行蛋白质体外翻译观察TTF1体外表达情况,用电泳迁移率变动分析(EMSA)验证获得的体外翻译蛋白TTF1是否具有与下游靶基因UGRP1启动子结合的能力.结果:成功构建了含TTF1编码基因的真核表达载体pcDNA 3.1/myc-His(-)C-ITF1,并能在体外表达ITF1蛋白.结论:能方便地获得TTF1体外翻译蛋白,为进一步研究ITF1蛋白与相应的DNA反应元件及其他转录因子的相互作用奠定了基础.