人类新细胞因子CKLFSF2羧基端蛋白在大肠杆菌中的表达纯化、抗体制备与鉴定

• 作者: 刘大振 宋泉声 张颖妹 王应 石爽 莫晓宁 钟英成 韩文玲
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 趋化素样因子超家族成员-2 重组蛋白纯化 多克隆抗体 趋化 免疫组织化学 抗体中和作用
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 93-99
• 页数: 7页
• 分类号: Q71
• 字数: 5914字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2007.01.013

摘要

哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子--趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2 C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2 C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2 C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2 C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用.