HSV-TK/HSV-sr39TK基因工程T细胞的研制

• 作者: 何徐彭 孙海英 徐开林 李德鹏 李振宇 潘秀英 高飞 鹿群先
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单纯疱疹病毒胸苷激酶 突变型 野生型 基因工程T细胞 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 移植免疫学
• 页码范围: 999-1003
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|R552
• 字数: 4966字
• 语种: 中文

摘要

目的:制备慢病毒载体为基础的野生型及突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK/HSV-sr39TK)基因工程T细胞(TK+T及sr39TK+T细胞),观察给予前体药物丙氧鸟苷/无环鸟苷后小鼠T淋巴细胞对其敏感性及存活情况.方法:构建含HSV-TK/HSV-sr39TK及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子慢病毒载体;采用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,收集病毒上清感染刀豆蛋白刺激的小鼠T淋巴细胞,给予不同浓度的前体药物GCV/ACV,用Cell Counting Kit(CCK-8)等方法检测T细胞的存活率.结果:转染293T细胞后,病毒滴度达106/U/ml以上;含不同启动子的病毒载体转染效率CMV＞PUB＞PGK,对小鼠T淋巴细胞的感染效率以CMV启动子最高;IC50值的测定显示sr39TK+T细胞对GCV和ACV的敏感性较TK+T细胞分别提高约2.5和17.4倍; ACV及GCV浓度在1～10 μmol/L sr39TK+T细胞活率下降最为明显,ACV组细胞存活率由(98.4±2.7)%下降为 (49.9±5.9)%,GCV组由(97.9%±2.7)%下降为(33.7±5.3)%,P＜0.05,随ACV及GCV浓度的增加,细胞活率下降趋势有所减弱;TK+T细胞对GCV敏感,细胞活率由(97.9±2.7)%下降为(38.4±5.5)%,(P＜0.05),对ACV不敏感,细胞活率由(98.4±2.7)%下降为(73.8±7.4)%,P＞0.05.结论:成功构建了HSV-TK/HSV-sr39TK基因工程T细胞,不同启动子对慢病毒载体在293T细胞的转染效率、转导自杀基因在T淋巴细胞内的表达均有影响;HSV-sr39TK+T细胞对GCV和ACV的敏感性高于TK+T细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何徐彭	徐州医学院附属医院血液科	39	188	7.0	12.0
2	李德鹏	徐州医学院附属医院血液科	42	195	8.0	12.0
3	潘秀英	徐州医学院附属医院血液科	123	539	10.0	18.0
4	鹿群先	徐州医学院附属医院血液科	68	283	8.0	13.0
5	孙海英	徐州医学院附属医院血液科	40	167	6.0	11.0
6	李振宇	徐州医学院附属医院血液科	88	507	11.0	18.0
7	徐开林	徐州医学院附属医院血液科	207	750	11.0	19.0
8	高飞	徐州医学院附属医院血液科	5	32	2.0	5.0