利用昆虫杆状病毒载体表达人碱性成纤维细胞生长因子

• 作者: 司杨 孙丽翠 张静宜 王雅梅 祁雅慧 闫豫东
• 来源期刊: 首都医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人碱性成纤维细胞生长因子 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 昆虫细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 229-233
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 3870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7795.2007.02.025

摘要

目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor,hbFGF)基因进行表达,并检测重组蛋白的特异性及生物学活性.方法 将人bFGF的cDNA克隆至杆状病毒转座载体pFastBacHTb中,并转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细菌DH10Bac中,获得重组Bacmid/bFGF;纯化DNA后,转染昆虫细胞Sf21,PCR鉴定重组病毒;进一步将重组病毒感染Sf21细胞,在Sf21细胞中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western bloting分析;MTT法检测表达产物的生物活性.结果 重组Bacmid/bFGF DNA直接转染昆虫细胞得到重组病毒rAcV-Bac-bFGF,病毒滴度MOI值≈8.重组病毒在感染后48 h开始出现一相对分子质量为23 000大小的特异带,感染后72 h蛋白量明显增加,96 h蛋白量达到最大,120 h蛋白量开始减少.在正常昆虫Sf21细胞的对照中未见该蛋白带.Western bloting显示目的蛋白条带与人bFGF抗体发生特异反应.MTT结果显示重组蛋白能明显促进3T3细胞的分裂增殖.结论 利用杆状病毒表达系统可成功表达具有生物学活性的bFGF蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫豫东	首都医科大学医学实验与测试中心	14	30	4.0	4.0
2	孙丽翠	首都医科大学生化与分子生物学系	30	73	5.0	6.0
3	张静宜	首都医科大学医学实验与测试中心	10	18	2.0	3.0
4	祁雅慧	首都医科大学医学实验与测试中心	32	114	6.0	9.0
5	王雅梅	首都医科大学生化与分子生物学系	38	96	6.0	6.0
6	司杨	首都医科大学医学实验与测试中心	13	39	5.0	5.0