UNC5B基因靶向shRNA表达质粒的构建及体外RNA干扰

• 作者: 张进祥 杨昀 王勇 邹丽
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 基因 RNA,小分子干扰 质粒 基因表达 重组蛋白质类
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 321-323
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2007.05.001

摘要

目的:探讨人UNC5B基因的双链RNA在体外对UNC5B表达的干扰作用及其规律.方法:构建两个能产生UNC5B的发夹状RNA(shRNA)的质粒载体Pgenesil-UNC5B1及Pgenesil-UNC5B2作为实验组,并构建无关序列shRNA表达质粒Pgenesil-NC作为阴性对照,将3种质粒分别转染脐静脉内皮细胞(HUVEC).转染24h后,荧光倒置显微镜下观察质粒转染效率,用G418筛选得到稳定转染的细胞,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测UNC5B在HUVECs中的表达情况.结果:转染24 h后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,转染效率约为40%～50%.实验组经G418筛选后稳定转染的细胞UNC5B mRNA均受到抑制,两种UNC5B基因靶向shRNA表达质粒对HUVECs中UNC5B抑制率分别为88%和52%.结论:本研究所构建的UNC5B shRNA表达质粒可在体外高效特异地抑制UNC5B的表达,为进一步实验奠定了基础.