逆转MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统的构建和鉴定

• 作者: 张伟 房居高 王鸿 钟琦 陈晓红 韩德民 黄志刚 黑虎
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 学科: 医学
• 关键词: 抗药性,多药 喉肿瘤 RNA干扰 慢病毒属 遗传载体
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 头颈肿瘤分子生物学专题
• 页码范围: 505-509
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4504字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-7002.2007.09.001

摘要

目的 构建并鉴定表达MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统并检测其对于喉癌多药耐药细胞系(LSC-1/TAX)多药耐药表型的逆转效果.方法 根据MDR-1基因序列,设计3条寡聚核苷酸序列,合成互补DNA链,插入慢病毒表达质粒pLVTHM中,与pCMV-dR8.74和pMD2G共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒.以RT-PCR、realtime PCR及Western blot方法检测三条siRNA在人喉癌耐药细胞系(LSC-1/TAX)中的干扰效率,并采用MTT方法检测干扰前后化疗药物的敏感性.结果 通过酶切和测序证实慢病毒载体构建正确,产生能够表达GFP和siRNA的慢病毒颗粒,浓缩滴度为＞1×108TU/ml.三条siRNA均可以感染LSC-1/TAX细胞系,其中第三条siRNA敲减效果最佳.结论 成功建立逆转MDR-1小干扰RNA的慢病毒载体系统,为逆转喉癌多药耐药表型的实验奠定了基础.