猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法的建立

• 作者: 冯志新 姜平
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: SYBR Green 实时PCR 细胞因子 猪
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 108-111
• 页数: 4页
• 分类号: S828|S852.4
• 字数: 2697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6273.2007.01.036

摘要

目的:建立一种用SYBR Green荧光染料检测猪细胞因子的实时PCR方法.方法:从猪外周血淋巴细胞中提取细胞因子mRNA,反转录成cDNA,利用SYBR Green荧光染料法实时检测IL8、IL10、IFNα、IFNγ和TNFα的mRNA表达水平.分别通过融解曲线和琼脂糖凝胶电泳分析各细胞因子检测的特异性;并对各细胞因子PCR产物进行梯度稀释后作为模板进行敏感性试验;利用建立的方法分别对正常猪和感染PRRSV的猪的外周血淋巴细胞中上述细胞因子进行检测,并以管家基因cyclophilin为内参照对各细胞因子进行定量分析.结果:建立的各细胞因子SYBR Green实时检测方法具有良好的特异性和敏感性,TNFα检测敏感性可达10个拷贝,其它细胞因子检测敏感性均可达100个拷贝.猪在感染PRRSV后,外周血淋巴细胞中IL8和IL10明显增加,而IFNα和TNFα略有下降.结论:建立了五种猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法,并能成功地应用于临床检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜平	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	186	1921	25.0	35.0
2	冯志新	南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室	5	118	5.0	5.0