用SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血

• 作者: 刘敬忠 周艳 梁燕 王战勇 王立荣 肖白 闫梅
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 实时聚合酶链反应 SYBR-Green1 融解曲线 α-地中海贫血
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 192-195
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2007.02.018

摘要

目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法 应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC)和Tm(melting temperature)值分析.PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α4.2,-α3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测.结果 检测-α4.2和-α3.7的PCR产物长度分别为1.65 kb、1.9 kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×102个拷贝、4.3×102个拷贝.该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍.结论 SYBR-Green1实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm 分析可以灵敏、准确地检测-α4.2、-α3.7、αα(包括αTα)及--SEA 4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断.该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王立荣	中国医学科学院基础医学研究所	6	77	3.0	6.0