表皮生长因子受体特异性单链抗体的筛选及初步鉴定

• 作者: 伍钢 彭吉林 戴文涛 沈关心 王国斌 王敏 赵晓蓉 黄韬
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮生长因子受体 抗体库 单链抗体 肿瘤靶向
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 192-194,198
• 页数: 4页
• 分类号: R730.3|R392.11
• 字数: 2659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8783.2007.02.031

摘要

目的 从大型人源抗体库Griffin 1中直接筛选出靶向EGFR的单链抗体.方法 以稳定转染的CHO-EGFR-GFP1细胞和未转染的CHO-K1细胞分别作为EGFR阳性和阴性细胞,采用负筛选的方法 进行筛选;通过比较每轮投入及洗脱出噬菌体的效价比以及细胞ELISA检测多克隆p-scFv与阳性、阴性细胞结合情况对筛选过程进行监测;采用菌落PCR挑选含有全长scFv片断的菌落,进一步用细胞ELISA检测单克隆p-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特异性;挑选EGFR特异性单克隆p-scFv采用DNA测序法确定克隆多样性.结果 经过5轮筛选,细胞裂解液中洗脱出噬菌体效价有500倍以上增长;细胞ELISA结果 显示多克隆p-scFv与CHO-EGFR-GFP1细胞和CHO-K1细胞均有明显结合,但有部分特异性结合EGFR;菌落PCR显示约45%克隆中含有完整的1kb scFv片断;经细胞ELISA、 DNA测序检测共获得1株EGFR特异性单链抗体,命名为F4-scFv.结论 F4-scFv可与筛选中所用EGFR阳性细胞特异性结合,为进一步研制以此单链抗体为靶向分子的抗肿瘤药物奠定了基础.