奥利亚罗非鱼DMRT1和DMRT4抗体制备及组织表达谱分析

• 作者: 吴婷婷 曹哲民 曹谨玲
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 生物学
• 关键词: DMRT1 DMRT4 原核表达 多克隆抗体 组织表达谱
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 497-509
• 页数: 13页
• 分类号: Q95
• 字数: 1229字
• 语种: 中文

摘要

DMRT1和DMRT4是DMRT基因家族的成员,该家族成员与果蝇的性别决定基因和线虫性别决定基因一样,所编码的蛋白质都包含一个具有DNA结合能力的保守基序,即DM结构域,并以锌指结构与特异DNA序列相结合,在性别决定和分化发育中起调控作用.采用RT-PCR方法分别从奥利亚罗非鱼卵巢和精巢中扩增克隆出DMRT1和DMRT4全长cDNA片段,构建表达载体,在大肠杆菌中表达了BMP-DMRT4和BMP-DMRT1蛋白.经Xa切割、Amylose-sepharose柱层析纯化后作为抗原免疫新西兰白兔制备了DMRT1和DMRT4多克隆抗体,并进行纯化.对纯化多抗进行Western blot分析,结果表明获得了高特异性的DMRT1和DMRT4抗体.为了观察DMRT1和DMRT4在组织中的表达谱,首先,我们通过实时荧光定量RT-PCR检测雌雄奥利亚罗非鱼多种组织mRNA的表达,仅在卵巢和脑中检测到DMRT4,在精巢中检测到DMRT1;其次,制备了多种组织匀浆蛋白,使用纯化的抗体进行Westernblot分析,仅分别在卵巢和精巢中检测到DMRT4和DMRT1蛋白的表达;制备多种奥利亚罗非鱼组织切片,使用纯化的DMRT4和DMRT1多抗进行免疫组织化学分析,发现DMRT4仅在卵巢表达,而DMRT1仅在精巢表达.这些结果有助于阐明DMRT4和DMRT1的功能及在鱼类性别调控中的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴婷婷	中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室	51	1509	23.0	37.0
2	曹谨玲	南京农业大学渔业学院	5	139	4.0	5.0
3	曹哲民	中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室	2	38	2.0	2.0