反向重复序列法构建神经病靶标酯酶RNA干涉表达质粒

• 作者: 伍一军 常平安
• 来源期刊: 毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经病靶标酯酶 RNA干涉 表达载体 反向重复序列
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-8
• 页数: 5页
• 分类号: R994.6
• 字数: 3212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-3127.2007.01.002

摘要

目的 构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体.方法 在正义和反义引物两端分别加上EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鉴定重组载体.脂质体法转染到Hela细胞中瞬时表达重组载体,酶活力测定其对细胞内神经病靶标酯酶活力的影响.结果 成功构建了NTE双链RNA稳定表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,表达该载体细胞内NTE活力明显下降至对照细胞的20%左右.结论 采用反向重复序列法将靶标基因的编码序列正反向插入到通用真核细胞表达载体中,是构建哺乳细胞基因双链RNA稳定表达载体的有效方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常平安	重庆邮电学院生物信息学院	28	68	5.0	6.0
2	伍一军	中国科学院动物研究所	28	277	7.0	16.0