山羊与牛乳腺差异表达基因的筛选及半定量RT-PCR分析

• 作者: 余刚 刘俊霞 张娟 张宁 武会娟 王海滨 绳贺军 罗军 韩雪峰
• 来源期刊: 动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 羊 乳腺 差异表达基因 SSH 半定量分析
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 710-716
• 页数: 7页
• 分类号: Q95
• 字数: 5044字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5507.2007.04.016

摘要

山羊和奶牛具有非常相似的泌乳过程,但在产乳量和乳成分(脂肪和蛋白含量)之间存在很大的差异,而且山羊奶还具有特殊的膻味.本研究根据山羊和牛在基因编码序列上具有非常高的保守性原理,利用抑制消减杂交技术对3只西农萨能奶山羊和3头荷斯坦奶牛泌乳末期的乳腺组织进行差异表达基因分析.分别提取山羊和牛乳腺组织总RNA,分离mRNA并合成cDNA,以山羊乳腺组织cDNA作为测试,牛的乳腺组织cDNA作为对照.cDNA经RsaⅠ酶切后将测试组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增.随机挑选克隆经PCR鉴定发现有150个克隆具有200 bp-1 000 bp插入片段,挑选50个差异片段不等的克隆进行测序及同源性分析,结果得到5个已知乳蛋白(αs2酪蛋白、β酪蛋白、К酪蛋白、α乳清白蛋白和β乳球蛋白)基因的编码序列和6个新的EST序列,EST序列已登录GenBank, 登录号分别为EG588067、EG588068、EG588069、EG588070、EG588071和EG588072.通过半定量RT-PCR分析,发现β酪蛋白基因mRNA表达量在山羊乳腺中显著高于其在牛乳腺中的表达量,К酪蛋白在乳腺中的mRNA 含量与其所表达的蛋白质在乳中含量存在很大差异,表明К酪蛋白虽然和其他酪蛋白具有相同的调控机制,但其在分泌和运输机制上与其他酪蛋白不同.