干旱胁迫下斑茅消减文库的构建及分析

• 作者: 刘文荣 张木清 张积森 翁笑艳 蔡秋华 阙友雄 阮妙鸿 陈如凯 饶进
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 斑茅 干旱胁迫 抑制性消减杂交 表达序列标签
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 961-967
• 页数: 7页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0496-3490.2007.06.016

摘要

以干旱胁迫下斑茅(Saccharum arundinaceum Retz.)叶片组织的cDNA为Tester,正常生长条件下斑茅叶片组织cDNA为Driver,利用抑制性消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization, SSH)构建斑茅干旱胁迫消减文库.文库克隆总量约为30000个,克隆重组率为99.2%;随机从文库中挑取3500个克隆分析表明,插入片段长度主要集中在200～1000 bp之间,500 bp以上的有463个克隆,500 bp以下的有3037个克隆,平均长度约450 bp; 通过随机对16个文库阳性克隆的测序及分析,3个克隆与ATP-NAD kinase、Aldo/keto reductase和锌指蛋白高度同源,3个克隆没有同源性,10个与逆境相关,是功能未知的EST.选择编号为EL0149和EL0145两个克隆进行Northern杂交验证,结果表明EL0149克隆为干旱胁迫上调表达的EST序列,而EL0145在正常供水和干旱条件下均无明显的的杂交信号.说明本研究克隆的SSH文库质量较高,可以进一步利用SSH文库结合芯片表达谱分析作物水分胁迫下的相关抗旱基因网络.