云锦杜鹃ISSR扩增条件的优化

• 作者: 李钧敏 金则新 顾奇萍
• 来源期刊: 广西植物
• 学科: 生物学
• 关键词: 云锦杜鹃 ISSR 优化 遗传多样性
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 植物系统学与生物地理学
• 页码范围: 560-563
• 页数: 4页
• 分类号: Q943
• 字数: 3244字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-3142.2007.04.006

摘要

以云锦杜鹃基因组DNA为研究对象,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,包括镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、Taq DNA聚合酶量、BSA浓度、引物用量以及退火温度等进行筛选和优化,建立了稳定、可重复的最佳反应体系:10 μL PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris·HCIpH9.0,50 mmol/L KCI,0.1%Triton X-100),1.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTP,0.45 U Taq DNA聚合酶,2 mg/mL BSA,12 pmol引物,16 ng模板DNA.利用所建立的优化反应体系从100个ISSR引物中共筛选出12个稳定性好、重复性高的引物,对5个居群共100个云锦杜鹃个体的DNA进行扩增,检测到170个位点,其中多态位点150个,多态位点百分率88.24%,5个居群的多态位点百分率平均为48.23%.云锦杜鹃ISSR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究云锦杜鹃的遗传多样性奠定了良好的基础.