冠状病毒核衣壳蛋白与延伸因子-1α的相互作用

• 作者: 刘萱 周冰 曹诚 李平 李晓明 杨尧 王秋娜 陈亮 靳彦文 马清钧
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: SARS冠状病毒 229E冠状病毒 核衣壳蛋白 延伸因子-1α 翻译抑制 多核细胞 多聚体
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 363-367
• 页数: 5页
• 分类号: Q75
• 字数: 4681字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.03.001

摘要

目的:分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白(N蛋白)和229E冠状病毒(HCoV-229E)核衣壳蛋白与细胞延伸因子(EF)-1α的相互作用、翻译抑制效应及与多核细胞形成的关系.方法:构建、表达及纯化SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GST融合蛋白,用GST-pull down方法分析其与过表达的EF-1α及内源EF-1α之间的相互作用;构建和表达SARS-N蛋白和229E-N蛋白的GFP融合表达载体,转染293T细胞,通过共聚焦显微镜分析SARS-N蛋白和229E-N蛋白的亚细胞定位及多核细胞的形成;在293T细胞中过表达SARS-N蛋白或229E-N蛋白,通过Co-IP分析其与EF-1α的相互作用.分别在细胞内和体外翻译系统中分析二者抑制报告基因翻译的程度.结果:SARS-N蛋白和229E-N蛋白都定位于细胞质,并不像其他冠状病毒的N蛋白那样定位到细胞核;二者都能诱导形成多核细胞,但229E-N蛋白导致细胞形成多核细胞的时间要晚;二者都能与EF-1α相互作用并且共定位于细胞质,二者都能导致EF-1α形成多聚体;二者在细胞内及细胞外对报告基因都有抑制翻译效应.结论:SARS冠状病毒和229E冠状病毒的核衣壳蛋白均定位于细胞胞质,可与EF-1α相互作用,导致EF-1α形成多聚体,抑制报告基因翻译及导致细胞形成多核.