兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 刘戈飞 宋旭红 张巧霞 李蕊 杜昆 梁斌 谢健平 黄东阳
• 来源期刊: 汕头大学医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶 表达 纯化 类视黄醇代谢
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 10-14
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4555字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4716.2007.01.003

摘要

目的:用原核蛋白表达系统对兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)进行功能性表达,并对其活性进行鉴定.方法:从兔肝中克隆出NRDR全长序列,运用Gateway表达系统将其编码区序列构建到表达载体(pDEST 17)上,再转化到大肠杆菌(E.coli)(BL21-AI)中表达出兔NRDR蛋白并鉴定其表达形式;取工程菌裂解上清通过金属离子亲和层析纯化出目的蛋白,再运用反相高效液相色谱法(HPLC)测定该酶的Km值和Vmax值.结果:构建出含兔NRDR编码区(768 bp)的表达克隆,转化到BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组兔NRDR蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的41.4%;经一步亲和层析得到的兔NRDR纯度为97.2%,比活性提高了64倍;经HPLC测定,该酶对视黄醛的Km值为(4.55±0.33)μmol/L,Vmax为(0.307±0.065)μmol/(min·mg).结论:应用pDEST 17可在BL21-AI中对兔肝NRDR进行高效的功能性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘戈飞	汕头大学医学院分子生物学中心	26	107	6.0	9.0
2	宋旭红	汕头大学医学院分子生物学中心	23	87	6.0	8.0
3	杜昆	汕头大学医学院分子生物学中心	8	37	4.0	6.0
4	谢健平	汕头大学医学院分子生物学中心	9	24	4.0	4.0
5	梁斌	汕头大学医学院分子生物学中心	14	51	4.0	6.0
6	李蕊	汕头大学医学院分子生物学中心	20	47	4.0	6.0
7	张巧霞	汕头大学医学院分子生物学中心	4	12	2.0	3.0
8	黄东阳		2	6	1.0	2.0