信号肽序列修饰的单纯疱疹病毒-2多表位复合DNA疫苗构建

• 作者: 夏天 张臻 徐金华 朱乃硕 朱小华 梁俊 王健 许炎 郑志忠
• 来源期刊: 临床皮肤科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA疫苗 病毒,单纯疱疹2型
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 553-555
• 页数: 3页
• 分类号: R752.11
• 字数: 2881字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4963.2007.09.004

摘要

目的:构建经糖蛋白gD信号肽修饰的单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP 27的多表位复合DNA疫苗.方法:国内HSV-2野生株经测序与PCR鉴定后利用PCR技术从其基因组中扩增出HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282、gD1-77 6个基因片段,PCR鉴定后按先后顺序,采用多基因片段一步酶切连接法获得HV融合基因片段,经pGEMT载体克隆后定向插入真核表达质粒pcDNA3.1载体中,构建出重组真核表达质粒HV-pcDNA3.1,并对其进行酶切分析及测序鉴定.PCR扩增gD146-179信号肽片段,进一步酶切连接构建重组质粒gDs-HV-his-pcDNA3.1,并对其进行测序鉴定.结果:酶切重组质粒HV-pcDNA3.1,电泳可见两条带,分别为融合基因HV(1.3 kb)和线性质粒pcDNA3.1(5.4 kb).测序结果表明,克隆基因插入方向正确,重组质粒gDs-HV-his-pcDNA3.1与GenBank HSV-2中相关序列同源性达99.9%.结论:成功构建了经糖蛋白gD信号肽修饰的HSV-2多表位复合DNA疫苗.