人外根鞘细胞体外培养及其增殖或抑制情况下米诺地尔浓度的选择

• 作者: 刘昕 刘晓燕 孙锡金 官浩 胡志奇
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 外根鞘细胞 培养 米诺地尔
• 年，卷（期）: 2007,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5461-5464
• 页数: 4页
• 分类号: R753.34
• 字数: 5179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.28.001

摘要

目的:观察钾通道开放剂米诺地尔在不同浓度下对体外培养人外根鞘细胞增殖活性的影响.方法:实验于2005-04/11在解放军第四军医大学西京医院烧伤实验室完成.①实验材料:所有毛囊标本均来自解放军第四军医大学西京医院美容整形术后,供体为健康成年男性,年龄28～49岁,局部头皮无秃发、感染及其他皮肤疾病,均对本实验知情同意.以同一供体的毛囊标本为一个批次,至少取3批以上标本进行培养.米诺地尔(Sigma公司,美国,批号M20001001).②实验方法:将头皮剪成0.3～0.5 cm宽的皮条,再将真皮层剪去少许,消毒后以Dispase酶消化过夜,16～18 h后揭去头皮表皮,拔出毛囊,使用无血清DMEM培养基清洗分离的毛囊.将毛囊置于胰酶+乙二胺四乙酸中消化8 min,血清中止消化后离心,再加无血清DMEM培养基洗涤,然后置于预先铺Ⅰ型胶原作基质的角质形成细胞无血清培养基中培养,至外根鞘细胞长出并接近融合时按1∶3传代.电子天平称取米诺地尔21 mg,加入角质形成细胞无血清培养基20 mL溶解,用稀释法分别配制成0,0.01,0.05,0.1,0.5,1.0 mmol/L 6个梯度浓度.③实验评估:取第2代外根鞘细胞,胰酶消化后计数,用相应培养基稀释成2×107L-1的细胞悬液,接种于96孔板.1 d后细胞贴壁生长,分别换用含有0,0.01,0.05,0.1,0.5,1.0 mmol/L的米诺地尔培养基,第4天加入四氮噻唑蓝在酶联免疫检测仪上检测吸光度值.结果:0,0.01,0.05,0.1,0.5,1.0 mmol/L米诺地尔吸光度值分别为0.501±0.019,0.774±0.038,0.819±0.040,0.418±0.040,0.329±0.026,0.220±0.031.结论:①角质形成细胞无血清培养基有助于人外根鞘细胞的生长和传代,是较合适的培养基.②0.01～0.05 mmol/L米诺地尔能够促进外根鞘细胞的增殖,而0.1 mmol/L以上浓度反而抑制其生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘昕	解放军第二军医大学长海医院整形外科	22	90	6.0	9.0
2	胡志奇	南方医科大学南方医院整形外科	88	283	9.0	12.0
3	孙锡金	南方医科大学南方医院整形外科	11	40	4.0	5.0
4	刘晓燕	解放军沈阳军区总医院整形外科	12	85	6.0	9.0
5	官浩	解放军沈阳军区总医院整形外科	1	2	1.0	1.0