HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定

• 作者: 孙脊峰 李占亭 杜德伟 杨安钢 杨洁 许彦鸣 贾林涛 赵晶
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧反应元件 荧光素酶 基因,报告
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2432-2435
• 页数: 4页
• 分类号: R692
• 字数: 2761字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.12.032

摘要

目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子.将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用.方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子.扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体.瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O3环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照.检测荧光素酶的相对活性.结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达.结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作.