野桑蚕GST-Omega1基因在草地贪夜蛾 Sf9细胞中的表达

• 作者: 李兵 沈卫德 贡成良 马晓英
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 野桑蚕 谷胱甘肽S-转移酶基因 克隆 表达 杆状病毒表达系统 Sf9细胞
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 996-1001
• 页数: 6页
• 分类号: Q966
• 字数: 5198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0454-6296.2007.10.004

摘要

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是昆虫的重要解毒酶之一.为了研究野桑蚕Bombyx mandarina中谷胱甘肽S-转移酶在真核表达系统中的表达情况.本研究通过RT-PCR从野桑蚕中肠中获得GST-Omega1基因的cDNA序列,该基因的开放读码框为771 bp,编码256个氨基酸.对推导的氨基酸序列用NCBI的蛋白质Conserved Domains工具进行在线分析,结果显示GST-Omega1的氨基酸序列中具有Cys38和8个GSH结合位点的Omega类基因保守序列.对所获得的基因克隆进表达载体pFastBacHT b中获得pFast-GST-Omega1,将其转化DH10Bac感受态细胞,获得Bac-GST-Omega1重组病毒DNA,用脂质体法转染草地贪夜蛾Sf9细胞,获得重组病毒.对表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,能检测到一条分子量约为33 kD的特异性条带,与推导的融合蛋白大小相符,该目的蛋白的表达量占总蛋白的14.4%.目的蛋白经His·Bind树脂纯化,用Lineweaver-Burk作图法测定其Km和Vmax,结果显示其Km为2.81 μmol/L,Vmax为2.70μmol/(mg·min).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兵	苏州大学生命科学学院	123	946	15.0	23.0
2	沈卫德	苏州大学生命科学学院	158	1178	17.0	24.0
3	贡成良	苏州大学生命科学学院	136	1227	19.0	27.0
4	马晓英	苏州大学生命科学学院	9	30	3.0	5.0