Real-time TaqMan RT-PCR快速检测犬瘟热病毒方法的研究

• 作者: 任炜杰 姜平 孙承英 张维 李林 王君玮 王志亮 王珊 赵永刚
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 犬瘟热病毒 荧光定量RT-PCR Real-timePCR 检测
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 265-268
• 页数: 4页
• 分类号: S858.292|S858.92
• 字数: 5371字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6273.2007.02.035

摘要

按照犬瘟热(CDV)N基因序列,设计合成了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了Real-time荧光定量RT-PCR技术,对细胞培养物、肝脏、肺脏、脑、脾脏、淋巴结以及鼻腔拭子等组织病料中的CDV进行了特异性检测和敏感性试验.同时,利用建立的Real-time荧光定量RT-PCR方法与常规RT-PCR以及韩国BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒对57份临床样品进行了检测.结果:用20p mol/mL的引物浓度各1 uL和20 pmol/mL的探针浓度0.3 uL,获得的荧光信号最强,曲线平滑.敏感性高,可检测到1.24×10-3 ng/uL的病毒RNA;特异性强,与NDV、AⅣ、NiPV等RNA病毒不发生交叉反应.试验重复性的变异系数(CV)分别为2.3%、2.5%和4.2%;与常规RT-PCR和BIOINDIST生产的BIT RAPID CDV检测试剂盒相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点.