大肠杆菌发酵生产重组人颗粒溶素

• 作者: 仲人前 周晔 谷明莉 邓安梅 钱琤 陈孙孝 陈燕
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 颗粒溶素 分批补料 发酵培养 重组蛋白质
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 64-67
• 页数: 4页
• 分类号: Q815
• 字数: 3561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.01.020

摘要

目的:在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS株,生产重组颗粒溶素(GNLY).方法:选取含pET28a(+)-GNLY的BL21(DE3)pLysS菌株单个克隆分级培养,将制备的二级种子液接种于发酵罐中.在发酵过程中,控制溶氧为30%～50%,温度为37℃;在基础培养基内生长4 h后,补加以甘油为碳源的补料,继续生长到11 h;加入葡萄糖至终浓度为1%,30℃诱导表达6 h;收集菌体,纯化制备目的蛋白.利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性,用CFU方法检测其生物学活性.结果:发酵液中最终菌体密度达80 g/L;纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%,含量为60 mg/L;经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性.结论:用含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达系统,可得到具有生物活性的重组颗粒溶素,为大批量生产提供了条件.