猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测

• 作者: CHENG Dan 仇华吉 史子学 孙元 成丹 朱庆虎 李娜 涂长春 赵和平 赵建军
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针 RT-nPCR
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 685-693
• 页数: 9页
• 分类号: S852.65+1|S858.284.4
• 字数: 7248字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2007.07.011

摘要

本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法.该方法在108～101范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10拷贝/μL的病毒核酸,与本实验室建立的RT-套式PCR(RT-nPCR)具有相近的敏感性,二者对152份不同样品检测符合率达94.7%.应用本方法对人工感染106TCID50猪瘟石门强毒的猪只感染后0～14 d全血中猪瘟病毒RNA进行了定量检测,揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化,证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性.此外发现,在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3～4 d可从其全血中检出病毒RNA.