Bcl-2对皮肤鳞状细胞癌细胞系SCL-1细胞Fas凋亡通路调控的研究

• 作者: 何春涤 姜奕 宋智琦 王雅坤 肖汀 金鑫 陈光 陈洪铎
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞凋亡 癌 鳞状细胞 抗原,CD95 原癌基因蛋白质c-bcl-2 Ceramide
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 424-427
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0412-4030.2007.07.011

摘要

目的 建立稳定转染bcl-2的鳞状细胞癌(鳞癌)细胞系,研究人皮肤鳞癌细胞凋亡的相关通路.方法 应用脂质体介导的基因转染法,将含有bcl-2 cDNA的逆转录病毒表达载体pIRESneo质粒导入皮肤鳞癌细胞系SCL-1细胞中,并以空质粒作为对照.经过G-418筛选后获得转入目的基因的细胞克隆,细胞扩大培养后用细胞免疫荧光染色法、RT-PCR和免疫蛋白印迹检测bcl-2的表达情况.然后用C2-ceramide和抗Fas单克隆抗体诱导细胞株凋亡,利用ELISA法检测可溶性DNA-组蛋白复合物,分析其凋亡的差异.结果 转染了pIRESneo-bcl-2的SCL-1细胞bcl-2蛋白和mRNA表达阳性,而转染了pIRESneo空载体的SCL-1细胞为阴性.不同浓度的C2-ceramide对SCL-1/bcl-2凋亡的诱导差异均无统计学意义,而对SCL-1/vector诱导的凋亡差异均有统计学意义.抗Fas单克隆抗体对SCL-1/bcl-2和SCL-1/vector诱导的凋亡,差异均有统计学意义,P＜0.01.结论 用基因转染法成功地建立了稳定高表达bcl-2蛋白的SCL-1细胞系,C2-ceramide诱导的SCL-1凋亡基本可以被bcl-2阻滞,而Fas所诱导的凋亡仅部分被阻滞,即SCL-1细胞系在被阻断了线粒体途径后,还可以经由死亡受体通路进行凋亡.