pSIREN/PB1 siRNA重组质粒抗甲型流感病毒研究

• 作者: 庄永华 李婉宜 李明远 李虹 杨晓芳 蒋忠华 赵培
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒 PB1 RNA干扰 质粒载体
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 350-352,355
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 2908字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2007.03.008

摘要

目的 研究重组质粒pSIREN/PB1在鸡胚尿囊液中干扰甲型流感病毒复制的效果.方法 设计1对编码PB1siRNA的寡核苷酸序列,经退火互补形成双链,再克隆至带有U6启动子的RNAi ready pSIREN-shuttle线性化载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切和测序鉴定重组质粒pSIREN/PB1.大量提取重组质粒pSIREN.PB1,用脂质体进行包裹后,按每只鸡胚90 μg质粒量接种于10日龄鸡胚尿囊腔,4血凝单位甲型流感病毒液分别于质粒接种后0 h、24 h、48 h接种于鸡胚尿囊腔,流感病毒接种48 h后收集无色澄清尿囊液进行血凝实验检测流感病毒效价.结果 甲型流感病毒PB1基因的siRNA编码序列成功克隆至pSIREN质粒载体.经酶切和测序分析,重组质粒pSIREN/PB1中的siRNA编码序列均完全正确.将脂质体包裹的pSIREN.PB1质粒和病毒液同时注射入鸡胚尿囊腔后,收获的甲型流感病毒效价最低.结论 成功构建了表达甲型流感病毒PB1siRNA的重组质粒pSIREN.PB1,并且它可以抑制鸡胚中流感病毒复制.此研究进一步证实了RNA干扰对流感病毒复制的抑制作用,为开发流感基因防治新方法奠定了基础.