慢病毒在大鼠胶质瘤细胞基因转导中的应用

• 作者: 何新舟 刘茜 戴学军 曹晖 林健 王伟民 王红梅 蒋立新 袁振华
• 来源期刊: 中国微侵袭神经外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒载体 质粒 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 大鼠 神经胶质瘤 9L细胞
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 358-362
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 3837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-122X.2007.08.007

摘要

目的 应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞.方法 构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定.利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞.RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达.用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果.结果 构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml.经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感.结论 成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞.