检测博尔纳病病毒RNA的RACE技术的建立

• 作者: 包丽丽 宋武琦 张凤民 李小光 李玉军 翟爱霞 车洋 钱钧 陈小贝
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 博尔纳病病毒 快速cDNA末端扩增 序列分析
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 337-338,342
• 页数: 3页
• 分类号: Q522.6
• 字数: 2676字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-376X.2007.04.007

摘要

目的 建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的3'RACE(rapid amplification of cDNA ends)方法.方法 根据已知的BDV p40基因序列设计上游引物sp1;提取BDV(H1766株)持续感染OL细胞的总RNA,用引物sp1和oligo dT进行3'RACE扩增,将PCR产物克隆到pGEM-T载体并转化到大肠埃希菌中,制备阳性菌落的目的质粒,进行序列测定和同源性比对;同时对检测BDV RNA的3'RACE方法的特异性和敏感性进行分析.结果 建立了检测BDV RNA的3'RACE技术;所获得的BDV p40基因的3'末端扩增产物的核苷酸序列与已知BDV(H1766株)p40基因的核苷酸序列同源性为100%;本方法对BDV RNA(mRNA)具有特异性,但对BDV p40基因重组质粒无扩增结果;并且可以检测到O.04 ng以上含量的BDV感染细胞的总RNA.结论 检测BDV RNA的3'RACE技术可以排除实验室污染造成的BDV基因扩增的假阳性,并可用于进一步分析BDV基因序列的特点以及评价BDV相关基因的表达情况.